Hogyan mérjük kataláz koncentráció

kataláz egy biológiai ( organikus) katalizátor . Ez az enzim az egyik leghatásosabb katalizátorok ismertek, és jótékony hatással van az emberi szervezetben, és elengedhetetlen az élethez. A kataláz egyfajta katalizátorként felgyorsításában megoszlását a hidrogén-peroxid . A hidrogén -peroxid egy anyagcsere mellékterméke , amely a sejtekre mérgező , ha nem távolítjuk el . A kataláz segíti összeomlanak hidrogén-peroxid vízre és oxigénre . Kataláz is segíti oxidáló más toxinok, például a fenolok , hangyasavat, formaldehidet és alkoholok . Ez az, amire szüksége van , két, 110 ml Chromogen foszfát pufferben
300 ui aljzat - 30%-os hidrogén-peroxid
400 μL.HRP - torma peroxidáz foszfát pufferben
60 ml foszfát puffer
250 ml mintahígítót felületaktív foszfát -puffer , két, 30 ml szubsztrát hígító -foszfát-puffer , két, 30 ml- stop reagenst - nátrium-azid , két, üveg 160 U /fiola normál kataláz
Spectrophotometer
10 ui állítható pipetták
1 cm úthosszúságú spektrofotometriás küvetták
1,5 ml-es polipropilén mikrocsöveket kupakkal
Test csövek - 12x75 milliméter (2,5 ml mindegyik )
Timer
Ioncserélt víz

Show More utasítások
1

Készítse elő az állomány a kataláz , hogy lesz mérési hozzáadásával 200 mikroliter ( pl) ioncserélt vizet , hogy a kataláz koncentráció 50 milliliter ( ml ) injekciós üveg . A szint a catalese koncentráció legyen milliliterenként 160 egység ( U /ml) .

2 Adjunk hozzá 30 jii hígított kataláz csövekbe . Adjunk hozzá 500 jil szubsztrátum (hidrogén -peroxid - 10mm H2O2 ) mindegyik csőbe . Legyen óvatos, ne splash a hidrogén-peroxid , amikor dolgozik vele .
3

Inkubálja minden egyes csövet egy percig szobahőmérsékleten .
4

Adjunk hozzá 500 - mu , L reagens minden injekciós üveg . Cap minden injekciós és keverjük megfordításából injekciós fel és le . Ne rázogassuk a keveréket , rázza az üveget , vagy keverjük meg egy tárgyat .
5

Adjon 20 lt minden reakcióelegy a kémcsövek. Adjunk hozzá 2 ml HRP reagens mindegyik kémcsőbe. Ismét keverjük össze az oldatot megfordításával a kémcsöveket többször is. Matton 6

Inkubáljuk az oldatot ismét , ezúttal 10 percig szobahőmérsékleten keverjük. Matton 7

Olvassa abszorbancia az oldat szintje egy spektrofotométerrel. A spektrofotométer fény hullámhossza pontosan meghatározni, hogy milyen anyagok vannak jelen, és , és milyen koncentrációban . Ez a módszer biztosítja pontos olvasata a kataláz koncentráció . Az információ hasznos összefüggésben a kölcsönhatás a kataláz a hidrogén-peroxid, mint ebben a kísérletben , és ahogy zajlik természetesen az emberi szervezetben.