Protokollok Hoechst festés

A Hoechst foltok fluoreszkáló festékeket használnak címkézés a DNS és RNS fluoreszcens mikroszkóppal és áramlási citometriás módszerek . Hoechst 33258 és Hoechst 33342 a leggyakrabban használt ezek a foltok . Ők képesek kötődni a DNS -molekulák , így a magok és a mitokondriumok megjelenni fluoreszkáló ultraibolya fényben . Protokollok Hoechst festés általános gyakorlat a biotechnológiai és genetikai laboratóriumok , és egy olyan sejt festési technikák segítségével mind Hoechst 33258 és Hoechst 33342 . Hoechst 33342 HSC festés és Őssejt tisztítása Protocol

Ezt a protokollt használják festésére sejtek egerek csontvelő . Technikusok felkészülni csontvelő mintát HBSS + só -oldat, HEPES puffer és a magzati borjú szérumot. Ezek a spin az oldatot , és adjunk hozzá egy előmelegített DMEM- közegben. A Hoechst festéket adunk hozzá. A megoldás kerül egy 98,6 fok vízfürdőbe pontosan 90 percig , számolt be a minisztérium Immunológiai a University of Pittsburgh . DNS- szegmensek jelennek fénycső alatt cytometer .
Hoechst 33342 DNA festés

során ezt a protokollt , technikusok felfüggesztett Hoechst 33342 festékkel desztillált vízben , adjunk hozzá 2 százalék magzati borjú szérum a sejt minta , miközben a pH-t 7,2- a segítségével egy pufferoldat . A sejteket ezután 98,6 ° F egy órát , és azonnal elemzik a berendezés úgynevezett citométer .

Festett DNS , akkor látható és fluoreszkáló szerint a University of Michigan Health System .


DNS detektálását a DNS-kötő fluorokróm Hoechst 33258

használt protokollok a berendezés úgynevezett spektrofotométer elemezni a DNS és RNS szegmensben. Technikusok használhatják Hoechst 33258 munkaoldatot és borjútimusz DNS-minták . Azt is, hogy egy oldatot elválasztjuk a DNS mintát és kémiai nevű etidium -bromid. Később , hasonlítsa össze a sejtfestést eredményeket mind a média , egy spektrofotométer , az aktuális Protocols a Cytometry .