A letapadt sejteket jegyzőkönyv

A sejteket a tenyészetben amelyek vagy olyan formában tenyésztettünk szuszpenzióban , például vérsejtek, vagy a sejtek , így a fibroblasztok igénylő felület, amelyre tudnak betartani . Néhány a felületek megkövetelheti bevonat különböző extracelluláris mátrixok a sejttípustól függően és tanulmány. Minden sejttenyészetek megkövetelik, hogy az elvégzett aszeptikus körülmények között. Optimális Környezet

A legtöbb sejttípus lehet tenyészteni, Dulbecco- féle módosított Eagle-féle közegben ( DMEM ), vagy Roswell Park Memorial Institute (RPMI ), azzal a kiegészítéssel, 10 százalék magzati borjú szérummal, a 2 milimoles aminosav glutaminnal és antibiotikumokkal , például 100 egység penicillinnel és 0,1 mg milliliterenként sztreptomicin . A sejteket fenntartják a saját adathordozónak egy párásított inkubátorban 37 ° C és 5 százalék széndioxid.
Hasítás

sejteket ellenőrizni kell naponta a fertőzés , a halál vagy a növekedési . Miután a szövettenyésztő lombik bevont 80 százalék , a sejteket fel kell osztani , hogy fenntartsák a sejtek egészségét és a log növekedési szakaszban. Média eltávolítjuk, és a sejteket mostuk foszfáttal pufferolt sóoldatban. A letapadt sejtek hozzáadását igénylik tripszin és etilén-diamin -tetraecetsav (EDTA ), hogy eltávolítsuk sejtadhéziós fehérjék. Gyengéd nyugtalanság távolítsa el a sejteket. Media kell hozzá , hogy semlegesítse a tripszin /EDTA-oldattal .
Szubkultúránál

hígított sejteket és tryspin /EDTA megoldás lehet centrifugáljuk és mosás a sejteket . A sejteket újra szuszpendáljuk, hígítjuk, és a média és új lombikokba újra szélesztjük . Minden alkalommal, amikor a sejtek szét a sejtek átjáró szám eggyel növekszik .
Média Változás

Media kell hetente kétszer eltávolítja a régi média és cseréje a új , felmelegedett a média .