Cell Felszíni biotinilezését jegyzőkönyv

biotinilezését használja a képességét, a oldódó vitamin, biotin , hogy kötődik a sejt fehérjék. Biotin kötődik a proteinhez , és sztreptavidin , ezért hasznosak a sejtbiológia , hogy szemléltesse sejt fehérjék. Lehetővé teszi a biztonságos biotinilációs címkézésére fehérjék képest technikákat, mint például a radioaktivitás , és nem befolyásolja a sejt normális funkcióját . Ez lehetővé teszi a kutatók számára, hogy tanulmányozza sejt receptorok , mint például a fehérjék , és ez lehetővé teszi, hogy jobban megértsék a betegségek és a betegségek folyamatokat. Függesztett címkéző Cells Matton

Mosás sejteket jéghideg, foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS ), hogy eltávolítsuk a szennyező anyagokat. Pufferek és glicint tartalmazó trisz versenyezni fog biotinilációs és el kell kerülni . Annak elkerülése érdekében, a belső biotinilezzük fehérjék , a címkézés elvégezhető 4 Celsius fok , vagy az azid jelenlétében . Újra szuszpenzióba sejteket PBS-ben és az oldható biotint, szulfo -NHS -LC -biotin .
Címkéző letapadt sejteket Matton

Mosás sejteket PBS-ben és inkubáljuk egy termék, mint például a szulfo -NHS -LC -biotin . A sejteket ezután lekapartuk egy csészébe , és lizáltuk tartalmazó pufferben a mosószer Triton-X- 100 és felkészült a megjelenítést.
Előkészítése Címkézett Cells

Követve inkubálás után a sejteket centrifugáljuk, és a pelletet egy mostuk PBS-ben. A sejteket PBS-ben reszuszpendáltuk , és a tisztított IgG- Sepharose gél . A kötött fehérje koncentrációra vannak hígítva , és melegítjük 100 Celsius fok.
Ábrázolása Cells

hígított fehérjék láthatóvá lehet nátrium -dodecil -szulfát- poliakrilamid gélelektroforézissel ( SDS- PAGE ), majd a fehérjével blot és az enzim keverék, sztreptavidin - torma -peroxid. A foltokat is láthatóvá kémiai reakció --- kemilumineszcenciára --- ami fényt bocsát ki . Sajátossága a biotinilálás lehet erősíteni antitestekkel a fehérje vizsgált .