Kompetitív kötési vizsgálat jegyzőkönyve

A kompetitív kötési esszé egy kísérlet , amely meghatározza, hogy a kötési kapacitást fehérjék vagy vegyszerek a specializált fehérjéket találtak egy sejtfelszíni , az úgynevezett receptorokhoz. A módszert gyakran használják , de az orvosi kutatás is képes meghatározni, hogy mely gyógyszerek receptorokhoz kötődnek és módosíthatja receptor aktivitást , amely viszont megváltoztathatja sejt viselkedését. Cella előállítása

újra szuszpenzióba sejteket jéghideg foszfáttal pufferolt sóoldattal ( PBS). Mérjük fehérjekoncentrációt a megerősítéshez egyenlő fehérje szint segítségével egy szakosodott kereskedelmi forgalomban beszerezhető protein- vizsgálattal.
Analitika

hozzáadása radioaktivitás -jelzett fehérje, amelyről ismert , hogy kötődik a receptorhoz , a ligandum, a sejt vagy szövet szuszpenzió. Adjuk hozzá a versenytárs , amely a vizsgált hatóanyag vagy protein vizsgálat alatt , és inkubáljuk a radioaktív ligandum és a sejtszuszpenziót . Egy sor eltérő koncentrációban a vizsgált hatóanyag tanulmányozni kell . Inkubáció után , külön kötött és nem kötött ligandum és mérni a radioaktivitást .
Data Analysis

A szokásos intézkedést meg kell határozni, hogy a fele a maximális koncentráció , amely gátolja a receptor más néven az IC50 . Ezt úgy számítjuk ki, ábrázolja a koncentrációk logaritmikus skálán az X tengelyen egy grafikon , míg az Y tengely jelenti a százalékos gátlás; szigmoid görbét , amely egy S -alakú, kell keletkezett . Az IC 50 a 50 százalékos gátlást pontot , és a megfelelő koncentráció az ábra alapján .