Intracelluláris Festési protokoll Áramlási citometria

Áramlási citometria egy olyan eszköz, ami hasznos a tanulmány a cella fehérjék. Ez hasznosítja a fény emissziós fluoreszcencia vagy a fehérjéket a sejten belül. Antitestek vagy szondák címkéjű fluoreszcencia használnak , hogy tanulmányozzák specifikus fehérjék . Áramlási citometria diagnosztizálására használják számos betegség , beleértve a rákot , de akkor is hasznos, az orvosi kutatásban. Rögzítése Cells

Cells kell rögzíteni , hogy fenntartsák a stabilitást a sejten belüli fehérjék. Számos fixálók lehet használni, mint például formaldehid vagy jég - hideg acetonnal . Fixálás követően , a sejtmembrán permealized kell , hogy lehetővé tegye az antitest , hogy belépjen a sejtbe. Mosószerek például Triton vagy NP -40, vagy jéghideg metanollal lehet használni, hogy a lyukakat a sejtmembránon.
Festési

Mosás sejtek a blokkoló pufferben 0,5 százalékos szarvasmarha szérum albumint hígítottuk foszfáttal pufferolt sóoldat, BSA /PBS-ben. A sejteket inkubáltuk blokkoló pufferben , hogy csökkentsék a nem specifikus kötődést. Primer antitest hozzáadása hígítva blokkoló pufferben inkubáljuk és hagyjuk , hogy szobahőmérsékleten , optimális ideig. Mossuk blokkoló pufferrel.
Analysis

inkubáljuk szekunder antitestet , amely a fluoreszcens tag, szobahőmérsékleten 30 percig . Ahhoz, hogy eltávolítsuk a nem kötődött antitestet mosás sejteket blokkoló pufferben. Spin- sejtek a pellet , majd oldja fel PBS-ben , és elemzi a citométerrel .