Mi a jobb módszer annak meghatározására, hogy az oldatos tej mikor válik kitisztul a tripszin kísérletben?

A tripszin kazein hidrolízis kísérlet végpontjának meghatározása az oldat tisztává válásának megfigyelésével szubjektív és pontatlan lehet. Kvantitatívabb és pontosabb módszer az oldat abszorbanciájának mérésére spektrofotométerrel egy adott hullámhosszon.

Íme egy továbbfejlesztett eljárás a tripszin kísérlet végpontjának meghatározására spektrofotométerrel:

Anyagok:

- Tripszin oldat

- Kazein szubsztrát oldat

- Nátrium-hidroxid (NaOH) oldat (0,1 M)

- Spektrofotométer

- Küvetták

Eljárás:

1. Készítse elő a reakcióelegyet:

- Egy küvettában keverjen össze meghatározott térfogatú kazein szubsztrát oldatot (pl. 1 ml) megfelelő térfogatú tripszin oldattal (például 0,1 ml).

- Inkubálja a keveréket megfelelő hőmérsékleten (például 37 °C-on) kívánt ideig (például néhány percig).

2. A reakció leállítása:

- Meghatározott időközönként (például percenként) vegyen ki egy kis térfogatot a reakcióelegyből (például 0,1 ml-t), és vigye át egy külön küvettába.

- Azonnal adjon hozzá elegendő mennyiségű nátrium-hidroxid oldatot (például 1 ml) a reakció leállításához.

3. Abszorbancia mérése:

- A spektrofotométerrel mérje meg az egyes leállított reakcióelegyek abszorbanciáját egy adott hullámhosszon (pl. 440 nm).

4. Az abszorbancia ábrázolása:

- Rajzoljon fel egy grafikont az idővel (x-tengely) és az abszorbanciával (y-tengely).

5. Határozza meg a végpontot:

- Elemezze az abszorbancia értékeket az idő függvényében. A végpont az az időpont, amikor az abszorbancia elér egy platót, vagy jelentős csökkenést mutat, ami a kazein kiterjedt hidrolízisét jelzi.

Ez a módszer objektívebb és kvantitatívabb végpont-meghatározást biztosít, mint az oldat kitisztulásának vizuális megfigyelése, mivel a kazein hidrolízise során kisebb peptidek és aminosavak felszabadulása miatti abszorbancia változás mérésére támaszkodik.