Analitika NBT Protokollok

NBT -vagy nitro kék tetrazólium egy kémiai vegyület használt biokémiai és immunológiai kimutatására az enzim alkálikus foszfatáz . Az anyag is használható a diagnózis teszt krónikus granulómás betegség , amely hatással van a sejtek immunodefense . NBT teszt protokollok immunoblot BCIP /NBT alkalikus foszfatáz szubsztrát oldatot és felderítése a galaktozidáz és alkalikus foszfatáz tevékenységek szövetben . Immunoblotting

Immunoblot egy olyan technika, antitestek kimutatására , amelyek a fehérjék részt vesznek a immunodefense folyamat , mondja Susan R. Haynes az " RNS - fehérje kölcsönhatás protokollok . " Ez magában foglalja a használatát NBT , valamint a szarvasmarha- szérum -albumin, 9E10 primer antitestekkel , Coomassie festés megoldás , nitrocellulóz membránok , Trisz-bázis -puffer -oldat, ammónium- per- szulfát, nátrium- dodecil-szulfát és vízzel telített butanolban .

BCIP /NBT- Alkaline Phosphatase Substrate Solution Matton

Technikusok készítsünk oldatot három csepp 1 százalék 5- Bróm -4 -klór -3 -indolil -foszfát ( BCIP ) , három csepp 1,5 százalékos NBT , két csepp a kémiai anyag és a Levamisol alkalikus foszfatáz (AP ) puffer , pH = 9,5 , az IHC szerint World honlapján . Az oldatot ezután szobahőmérsékleten inkubáljuk és a rendelkezésre álló használható.
Galaktozidáz kimutatása és alkalikus foszfatáz tevékenységek Tissue Matton

galaktozidáz olyan enzimek , amelyek a megtörni galaktozid molekula jelen van a baktériumok az Escherichia coli és más élőlények. Protokoll szerint Online alatt ez a protokoll , a biológusok használja patkány sejtminták kezelt PBS oldatban , glutáraldehid és paraformaldyde . Aztán, hogy előkészítse a bróm -klór -indolil - galaktopiranozid vagy X -gal- reakció puffer a minták , kálium -ferrocianid , magnézium-klorid , nátrium- dezoxi-kolát és a mosószer Nonidet P -40 . Technikusok használni nitro blue tetrazolium ( NBT ) helyett kálium- ferrocianid , mint a gyorsabb alternatíva . Cell mintákat később figyelhető meg mikroszkóp alatt .