A TPA tisztítása jegyzőkönyvek

Szöveti plazminogén aktivátor TPA vagy egy olyan típusú szerin proteáz , amely a fehérje képes elpusztítani a vérrögök képződését. TPA-t találtak a sejtekben , hogy belsőleg terjed az ereket. TPA protokollok része a gyógyszerészeti és orvosi kutatások stroke , valamint a szív-és tüdőbetegségek, mint például a tüdőembólia és a szívinfarktus. A TPA tisztítása utal, hogy a fehérje izolálását a más molekulák keresztül egy sor olyan folyamatok, beleértve a kromatográfia és elektroforézis . A TPA tisztítása származó Hog Kidney Matton

Ezt a protokollt használják a vizsgálatokban a fibrinolízis , a folyamat a törés a termék az úgynevezett koagulációs fibrin , amely kapcsolatban áll a tumor kialakulását . Technikusok kivonat TPA aceton szárított disznó vese kálium -acetát-puffer , pH = 4,2 -nél . Aztán, hogy adjunk hozzá ammónium-szulfát , hogy rábírja a sejt csapadék . Hozzáteszik n-butil - sepharose , hogy a mintákat , amelyeket ezután egy chromatographer analizáljuk . Concanavalin A-val is adunk hozzá, és chromatograph.y külön különböző fehérjék végzik .
TPA tisztítása kínai hörcsög petefészek és az E. coli sejteket Matton

egy fehérje tisztaságát fontos tényező a siker a biológiai kísérletek. A tisztított TPA is kereskedelmi forgalomban kapható , ezzel időt takarít meg , és elkerüli a veszélyeztetése kísérlet miatt rosszul tisztított oldatban. Ez a protokoll magában foglalja a tisztítási folyamatok TPA az emlős és bakteriális sejtekben. Technikusok csapadék sejtminták szűrlet őket, és végre affinitás és gél kromatográfia elemzés . Később elemezni és összehasonlítani az eredményeket , mielőtt kereskedelmi termelés.
Kifejezése aktív humán TPA E. coli

derített sejtlizátumokat egészül ki lizin - Sepharose oszlopon elemzett egy chromatographer és mossuk nátrium- klór. Egy másik mintát felvittük egy második fehérjét tartalmazó kromatográfiás oszlopra , amely kötődik a TPA -val nagyon nagy affinitással. A mintát a második oszlop a kevert oldatot egy cink - sepharose . Az eredményül kapott fehérje mutat több mint 90 százaléka tisztaság szerint a folyóirat " Applied and Environmental Microbiology ".