Vizsgálati módszer A plakk

Az assay egy alkalmazott technika vírusok izolálására és tisztítására , és annak meghatározására, hogy a vírus titer ( a legalacsonyabb koncentráció , amely a vírus fertőzést eredményez .) Egy plakk assay eredetileg úgynevezett virológiai vizsgálat lett kifejlesztve, hogy mérni és számolni a fertőzőképessége bakteriofágok . Szerint biológia - Online.org , azt később is alkalmazni kell számolni emlős vírusok. A tények

emléktábla egy összefolyó , egyrétegű kultúra sejteket. Ez képezi eredményeként a fertőzés az egyik a sejtek egyetlen vírus részecske, biológia - szerint Online.org . Miután a sejt- fertőzött , a vírus replikálódik , és végül megöli a sejtet . Továbbá , az újonnan másolt vírusrészecskék elterjedt , megfertőzni, és megölik a szomszédos sejteket.
Function

A plakk vizsgálatban a kultúra első festett egy adott festék. Ez a die foltok egyetlen életképes (élő ) sejtek , szerint biológia - Online.org . Ennek eredményeként , a halott sejtek jelennek meg a tenyészetben nem festődő , ellen, a festett háttér. Jelenleg a plakk assay alkalmazzák felismerni sejtek antitesteket termelnek , amelyek elpusztítják a vörösvértesteket a hemolízis .
Jellemzők

vörösvértestek sejtek ( más néven vörös vérsejtek ), amelyek hemoglobint tartalmaznak és szállítási oxigén és a szén -dioxid a vérből , tüdőből és a szövetekben. Hemolízis akkor jelentkezik, ha vörösvértestek átvágni , és engedje hemoglobin szerint biológia - Online.org . Ennek eredményeként , a plakk vizsgálatban a plakk alapján egyértelmű , és azt jelzi , hogy a vörös vérsejtek már hemolizált antitestek által .
Módszer I. rész

Tíz -szeres hígítású vírus állomány készülnek elvégzése előtt a plakk assay és 0,1 ml aliquiots kerülnek a sejtek egyrétegű . Ezt az elegyet inkubáljuk egy ideig úgy, hogy a vírus van ideje , hogy megtámadják a sejteket. Továbbá az egyrétegű fedezi a táptalaj , amely egy anyag ( általában agar ) szerint a " vírusfertőzést : A plakkvizsgálattal " Vincent Racaniello . A tápközeg egy gélt képez, és miután a tenyészetet , az eredeti vírus- fertőzött sejtek engedje utódokra. A gél korlátozzák az a vírus terjedését a környező sejtek , és ennek eredményeként , a fertőző részecske termel egy kör alakú zóna úgynevezett plakk . Idővel , a plakk nő a mérete látható szabad szemmel és színezékek használják, hogy fokozza a vizuális .
Módszer Part II

vírus titer kerül kiszámításra plakk formáló egység , az úgynevezett PFU , milliliterenként . Ezek megszámláljuk, és , hogy a hiba minimalizált , csak lemezek , amelyek tartalmazzák a 10 és 100 közötti plakkokat megszámoltuk. Továbbá, az " vírusfertőzést : A plakkvizsgálattal , " minden 100 számít plakkok ugyanazon titer változik a plusz-mínusz 10 százalék. Így a becsült hiba a plakk assay mintegy 10 százalékkal , ha végre helyesen .