Mi gélelektroforézis ?

Gél elektroforézis egy olyan módszer elválasztására , azonosítására és jellemzésére keverékei fehérjék vagy nukleinsavak . Denaturált minták vándorolnak alkalmazása után a villamos energia egy vékony , nedves gél jellemzően poliakrilamid vagy agaróz . Az elválasztott mintákat festettük így lehet látni. Gélelektroforézis használják a fehérje-és nukleinsav kutatás és a kórházakban azonosítására szokatlan fehérjék vagy DNS- minták betegségek diagnosztizálására , genetikai hibák és a genetikai kapcsolatokat. Mintaelőkészítés

Amikor egy detergens , például nátrium- dodecylsulfonate (SDS ) adunk hozzá , hogy egy fehérje vagy nukleinsav , akkor a detergens társítani , és hajtsa ki ( denaturált) fehérjék és nukleinsavak . Fehérjék denaturálása megkönnyíti , hogy meghatározzák a molekulatömege elektroforézis . A szükséges mennyiségű mintát tipikusan 100-500 nanogramm mintánként sávot fehérjék és 5 és 100 ng sávonkénti nukleinsavak össztérfogatban mintegy 25-40 mikroliter .
Gélek

gél , jellemzően készült poliakrilamid vagy agaróz, úgy állíthatjuk elő, vagy vásárolt e fehérjék elválasztásához . A gél olyan, mint a zselatin . Ez leginkább a víz , de elég szilárd kezelésére . A gélek tartalmaznak puffert , hogy ellenőrizzék a pH-t. A gél nagyon vékony ( 1-2 mm), és téglalap alakú . Az egyik oldal úgy néz ki, mint egy fésű , sok hiányzó fogak . A hiányosságok nevezzük kutak .
Sample Loading

egy helyen a gélt kamrában pufferrel és denaturált fehérjék hozzáadására a lyukakba. Mintákat ismert molekulatömegük adunk a külső kutak . Gélek készülnek változó mennyiségű poliakrilamid . Egy alacsony gél erőssége ( 4 százalék ) jobb elválasztására nagy molekulatömegű molekulák , míg a gél-szilárdsága nagyobb ( 12 százalék ) használják nagyobb molekulatömegű molekulákat. Egy gradiens gél gél erőssége változik , és lehet külön sokféle fehérjék a veszteség néhány felbontással.
Elektromigráció

Az alkalmazás egy nagy elektromos feszültség a denaturált fehérjék elmozdulni az alján a is. Minél nagyobb a súlya a fehérje , annál lassabban mozog . Amikor az elektromos áram ki van kapcsolva , a fehérjéket nem mozog . Egy eltávolítja a gél a kamrából és a sziklák , hogy egy edényben festék. Szerves festékek, mint például a fém- , Coomassie kék vagy színezékek használják fehérjék folt , míg fluoreszcens festékek , mint például etidium -bromidot használnak nukleinsavak .
Az eredmények elemzése: Matton

A eltávolítása felesleges folt , láthatjuk, hogy a keverék szétválasztható zenekarok , hogy néz ki , mint a létra . A sávok helyzetét összehasonlítjuk a távolság által mozgatott szabványok meghatározzák a molekulatömege a minta az egyes sávokban . A gél dehidratált alkohollal és száraz , így lehet menteni. A szín intenzitása a zenekar , akkor mérhető koncentrációjának meghatározására a fehérje egyes sávokban.
Protocol Development

szabványos protokollok állnak a dolgozó jól ismert fehérjék. Ha egy kutató dolgozik egy ismeretlen minta , a gél erőssége , puffer típusa , pH , feszültség , időtartam , és a folt , mind kell optimalizálni , hogy a legjobb elválasztás és a jel .
protokollok