MBP- tisztítással Protokollok

MBP- vagy maltóz kötő fehérje található a baktérium az Escherichia coli , amely része a bélflóra az emberek és állatok. A tisztítást az MBP magában foglalja egy sor olyan eljárást , amelynek célja a fehérje elválasztására összetevőket. A molekuláris biológia, MBP létfontosságú tisztítási eljárás a tanulmány a szerkezete és funkciója a fehérje. MBP tisztítási protokollok MBP fúziós fehérje tisztítás , kisméretű MBP - fúziós és maltóz kötő protein fúziós tag tisztítás . Olvasztott MBP Fehérjék tisztítása során Matton

ezt a protokollt , technikusok mossuk 20 ml-t az amilóz polimer gyantát ATRIS oldattal pH = 7,4 , nátrium-klorid , Mercaptoethanol (ME ) és az etilén-diamin -tetraecetsav (EDTA ) szerint a jegyzőkönyvek Online . Cell mintákat hozzá, centrifugáljuk, és gélelektroforézissel elemezzük . A mintákat is elemeztük chromatographer , ahol a technikusok eluátum vagy megfigyelni a megoldás összetevői , miközben áthalad az oszlopon.
Kisléptékű MBP - fúziós fehérje tisztítása

szerint a jeruzsálemi Héber Egyetem , biológusok használja fel a reagenst izopropil BD- 1 - tiogalaktopiranoziddal ( IPTG ) , spin sejtkultúrában 10 percig 8000 fordulat percenként 39,2 fok . Később távolítsa felülúszó folyadékot , és keverjük össze a hideg PBS- pufferrel a mintában, amelyek van osztva több csövek és ismét centrifugáljuk . A mintákat tárolnak -112 Celsius fokra utóvizsgálatunk .
Maltóz kötő fehérje Fusion Tag Purification

Affinity címkéket genetikailag módosított molekulák alkalmazott molekuláris biológia felismerni és megtisztítja fehérjék. Ez a protokoll egy olyan komplex eljárások három részre osztja , melyek közé tartozik az építési polihisztidintriád fehérje marker ( HisMBP ); kísérleti kísérletet , hogy értékelje a fehérje oldhatóságát; és a nagy léptékű tisztítási MBP molekulák , Nature jegyzőkönyvek szerint . Eltekintve a mintákat E. coli , technikusok használhatják ampicillin, kanamicin, IPTG-t , anhidrotetraciklin , glükóz -monohidrát , a sejt lízis pufferben , DNS-polimeráz , PCR- primereket , Tris-acetát - EDTA-t és etidium -bromid.