Hogyan sorakoznak DNS- elemzés?

Agaróz gélelektroforézis a leggyakoribb módszer a vizuális DNS fragment analízis , amely lehetővé teszi a technikusok , hogy vizuálisan felismerni, DNS- töredékek alapján méretét. Az agaróz gél fenntartja a mágneses mezőt és , mivel a DNS negatív töltés , mozog pozitív vége felé a mágneses mezőt. Kisebb DNS- töredékek gyorsabban át a gél és a nagyobb töredékek lassabban mozognak . DNS-fragmenseket megfestjük fluoreszcensen egy interkaláló szer néven ismert etidium -bromid. Ez lehetővé teszi az összehasonlítás több elektroforézisnek alávetett DNS-minták a gélen. Ez az, amire szüksége van
agaróz gélen , 0,7 százalékkal, 2 százalék
trisz -borát-EDTA (TBA ), trisz - acetát-EDTA (TAE ), nátrium- lítium-acetát (JA ), bórsav (SB ) puffer
etídium-bromid
Gel loading dye
Gel tálca
elektroforézis kamra
Gloves
védőszemüveget
pipetta
elektroforézis fésű
Show More utasítások
előkészítése 0,7 százalékos agaróz gélben
1

Mérjünk ki 0,7 gramm agaróz port , majd tegyük egy nagy ( 250 ml ) es Erlenmeyer-lombikba .
2

Add 100ml egy 1X (rendes ereje) pufferben ( TAE , TBE , SB vagy LB- puffer) , hogy az Erlenmeyer- lombikba, amely az agaróz por.
3

Mikrohullámú vagy hő alkalmazásával egy Bunsen égő körülbelül egy percet, amíg az oldat tiszta és a agaróz feloldódása .
4

Vegyük ki a lombikot a hőforrás és hagyja lehűlni 55-60 Celsius fok.
5

Add 1 jil ( mikroliter ) etídium -bromidot a lehűtött oldatot agaróz segítségével egy megfelelő méretű pipettával , általában 1ml. Rázzuk az oldatot keverjük össze. Matton

6 Öntse a gél lassan a gél tálca, biztosítva nincs buborék képződés során ezt a folyamatot. Ha nincs mellékelve jól gátakat a gél tálcába, használja maszkolószalaggal formában őket.
7

Vigye elektroforézis fésűvel óvatosan a gél , így biztosítva a határozott álláspontot , és a megfelelő irányba . Elektroforézis fésűk nagymértékben változhat a fogszám vannak. Hagyjuk , hogy a gél beállított körülbelül 25 perc. Matton 8

Elmerít a gélt azonos puffer előállításához használt agaorse megoldás - ebben az esetben , egy 1X pufferben. A gélt Elmerít legfeljebb 5 ml futtató pufferben.
Előkészítése és betöltése a DNS agaróz gél analízishez
9

Transzfer 5-10 jii a minta ( ek) a reakciójuk csövek friss csöveket . Abban az esetben, ha szeretné használni a teljes reakcióelegy friss cső nem szükséges .
10

Add 0,2 X loading puffert minden az új mintát tartalmazó csöveket a DNS- minta betöltése .

11

Vegye le a elektroforézis fésű lassan , biztosítva, hogy nem törik a gél , vagy hozhat létre tér között, az alján a gél és a gél tálca .
12

Adjunk hozzá öt 12 jii megfelelő DNS markert az első jól által létrehozott elektroforézissel fésű . Függetlenül attól, hogy a DNS- marker alkalmas függ a méret a töredékek várnak az Ön mintából .
13

Load öt és 10 jii a mintákat a többi üregben , és adjon hozzá egyenlő összege azonos a DNS marker az utolsó is.
14

Helyezze az elektródákat a elektroforézis kamra csatlakoztassa a vezetékeket a megfelelő aljzat a kamrába , és állítsa az elektróda 50-150 V

15

Hagyja a gélt , hogy indul az egy-négy órával .
az eredmények elemzése
16

Vegye le a gélt a gél kamra és tegyük akár egy UV szobában a vizuális azonosítás, vagy helyezze egy gépet, amely képes arra, hogy egy fényképet a gél .
17

Mérje markerek távolságot a migráció a kutak .

18.

való távolságának ábrázolása ellen, a méret a sávok semilog milliméterpapírra és felhívni a legjobban illeszkedő vonaltól .
19

Számítsa ki a távolságokat az ismeretlen zenekar .

20

Becsüljük meg a mérete a ismeretlen zenekar rajzoljon egy vonalat fel a megtett távolságot az Ön ismeretlen zenekar , amely megfelel a vonal a legjobb illeszkedést.
21

Rajzolj egy vonalat ezen a találkozási pont át a méret tengelyre .