Egészség és a Betegség
Mérjünk ki 0,7 gramm agaróz port , majd tegyük egy nagy ( 250 ml ) es Erlenmeyer-lombikba .
2
Add 100ml egy 1X (rendes ereje) pufferben ( TAE , TBE , SB vagy LB- puffer) , hogy az Erlenmeyer- lombikba, amely az agaróz por.
3
Mikrohullámú vagy hő alkalmazásával egy Bunsen égő körülbelül egy percet, amíg az oldat tiszta és a agaróz feloldódása .
4
Vegyük ki a lombikot a hőforrás és hagyja lehűlni 55-60 Celsius fok.
5
Add 1 jil ( mikroliter ) etídium -bromidot a lehűtött oldatot agaróz segítségével egy megfelelő méretű pipettával , általában 1ml. Rázzuk az oldatot keverjük össze. Matton
6 Öntse a gél lassan a gél tálca, biztosítva nincs buborék képződés során ezt a folyamatot. Ha nincs mellékelve jól gátakat a gél tálcába, használja maszkolószalaggal formában őket.
7
Vigye elektroforézis fésűvel óvatosan a gél , így biztosítva a határozott álláspontot , és a megfelelő irányba . Elektroforézis fésűk nagymértékben változhat a fogszám vannak. Hagyjuk , hogy a gél beállított körülbelül 25 perc. Matton 8
Elmerít a gélt azonos puffer előállításához használt agaorse megoldás - ebben az esetben , egy 1X pufferben. A gélt Elmerít legfeljebb 5 ml futtató pufferben.
Előkészítése és betöltése a DNS agaróz gél analízishez
9
Transzfer 5-10 jii a minta ( ek) a reakciójuk csövek friss csöveket . Abban az esetben, ha szeretné használni a teljes reakcióelegy friss cső nem szükséges .
10
Add 0,2 X loading puffert minden az új mintát tartalmazó csöveket a DNS- minta betöltése .
11
Vegye le a elektroforézis fésű lassan , biztosítva, hogy nem törik a gél , vagy hozhat létre tér között, az alján a gél és a gél tálca .
12
Adjunk hozzá öt 12 jii megfelelő DNS markert az első jól által létrehozott elektroforézissel fésű . Függetlenül attól, hogy a DNS- marker alkalmas függ a méret a töredékek várnak az Ön mintából .
13
Load öt és 10 jii a mintákat a többi üregben , és adjon hozzá egyenlő összege azonos a DNS marker az utolsó is.
14
Helyezze az elektródákat a elektroforézis kamra csatlakoztassa a vezetékeket a megfelelő aljzat a kamrába , és állítsa az elektróda 50-150 V
15
Hagyja a gélt , hogy indul az egy-négy órával .
az eredmények elemzése
16
Vegye le a gélt a gél kamra és tegyük akár egy UV szobában a vizuális azonosítás, vagy helyezze egy gépet, amely képes arra, hogy egy fényképet a gél .
17
Mérje markerek távolságot a migráció a kutak .
18.
való távolságának ábrázolása ellen, a méret a sávok semilog milliméterpapírra és felhívni a legjobban illeszkedő vonaltól .
19
Számítsa ki a távolságokat az ismeretlen zenekar .
20
Becsüljük meg a mérete a ismeretlen zenekar rajzoljon egy vonalat fel a megtett távolságot az Ön ismeretlen zenekar , amely megfelel a vonal a legjobb illeszkedést.
21
Rajzolj egy vonalat ezen a találkozási pont át a méret tengelyre .