Protokollok biotinilációs

biotinilezését az a folyamat összekötő biotin , vagy H-vitamin , hogy egy fehérje vagy egyéb molekulák . Ez a tudományos eljárás többnyire a biotechnológia és molekuláris biológiai kutatások bevonásával DNS , fehérjék és antigének , amelyek a molekulák az immunrendszer felismeri , mint betolakodókat. Biotinilációs protokollok tartalmazzák a biotinilálása antitestek és peptidek , valamint a sejtfelszíni biotinilációs . Biotinilációs antitestek Matton

hivatkozó biotint antitestekhez fehérjék előállítására , amikor belép egy antigén a szervezetbe , technikusok használja nátrium -hidrogén-karbonát ( NaHC03 ) , pH = 9; dimetil -szulfoxid ( DMSO);

NHS - biotin és a sós anyag, a PBS . A mintákat összekeverjük a nátrium- hidrogén-karbonát, amelyet később hozzáadunk NHS - biotin DMSO-ban . Az oldatot ezután hozzáadjuk a vizsgált antitestek és inkubáltuk egy darab úgynevezett forgató berendezés négy órán át szobahőmérsékleten, vagy egy éjszakán át 39,2 fok. Végül , az oldatot PBS-sel hígítjuk .
Cell Surface biotinilezését Matton

A sejtfelszíni biotinilálás protokollt , technikusok használhatják szövettenyészetben , foszfát - pufferelt sóoldatban ( PBS) pH = 7,4 és szulfoszukcinimidil -2 - ( biotinamido )-etil -1 ,3 - ditiopropionát pufferoldattal egyensúlyba savasság és aminocsoportokat tartalmazó Tris-HCI , szerint : Current Protocols in Protein Science.The sejteket összekeverjük a biotin és a puffer -oldattal , dekantáljuk és centrifugáljuk . Szilárd tartalmak és specifikus fehérjék később analizáljuk egy gél elektroforézis lemez .
Biotinilezését Peptidek Matton

biotinilálás elvégzi a peptidek , az alkalmazott reagens NHS Biotin -SS szerint Philip Shepherd " Monoclonal Antibodies: a Practical Approach ". Rövid peptidek fragmensei aminosav , a molekulák, fehérjék és a DNS-t képez . Ebben a jegyzőkönyvben a kereskedelmi megoldás NHS - SS Biotin vízben feloldjuk . Ezután a peptidet mintát adunk hozzá, valamint nátrium -hidrogén-karbonát , vagy az egyensúly savasság pH-ja. Az oldatot ezután jégen inkubáljuk két órán át. Technikusok lehet megfigyelni a mintát vagy anélkül biotin molekula .