Hogyan mérjük Cell életképesség

A legtöbb biológiai kísérleteket érintő sejtkultúrában , egy kritikus lépés magában foglalja annak ismeretét , amelyek a sejtek élnek, és amelyek halott a mintában . Dye kirekesztés a legnépszerűbb módszer a mérési sejtek életképességét . Színezék kizárás alapja az elmélet, hogy az élő sejteket tartalmazó intakt membránok és az elhalt sejtek nem , így az elhalt sejtek elnyelik a festék a citoplazmába . Vannak különböző festékek és eljárások és módszerek úgy dönt, kell alapulnia költség , érzékenység , könnyű és hossza eljárást. Tripánkék festék egy közös mérésére használt sejtek életképességének , mert az eljárás lehet tenni öt és 10 perc és a költségek csak az összeg a festék reagenssel. Ez az, amire szüksége van
0,4 % tripánkék reagens
hemacitométer
fedőlemez
Mikropipetta
Pipettahegyek
foszfát pufferelt sóoldat ( PBS)
fénymikroszkóp

Show More utasítások
1

Szerezzen be egy pellet a sejtek te mérés .
2

sejtüledéket a PBS , hogy körülbelül 5 x 105 sejt /ml . PBS-t használjuk, mert életképessége pontosabb mérések vannak , amikor a sejteket szérum-mentes környezetben; szérum fehérjék is foltot , és kapsz félrevezető eredményt.
3

Add egyenlő részre sejt szuszpenzió PBS egyenlő rész 0,4 % tripánkék szerezni 1-2 hígítás ( pl. : 100 ul sejtet 100 ul tripán kék) , és keverjük pipettázással fel és le.
4

Inkubáljuk keverék kevesebb, mint három percig szobahőmérsékleten . Ha a sejteket megszámoltuk mintegy öt perc elteltével , az életképesség pontatlan lesz miatt sejthalált .
5

A fedőlemez már a helyén van, töltse ki minden oldalán egy hemacitométer számláló a sejtszuszpenzióhoz. Általában mindkét oldalon lesz 10-20- ul.
6

Helyezze a hemacitométer a színpadon a fénymikroszkóp és elsősorban fel a sejtek .
7

mindkét oldalán a hemacitométer tartalmaz több négyzetek. Count az összes sejtek egy négyzet a hemacitométer . Ezután számolja meg a nem életképes ( kék) és életképes ( törlés) sejteket külön-külön , az ugyanazon a téren .
8

A százalékos életképes sejtek a téren elosztjuk az életképes sejtek száma az összes sejtet és megszorozzuk 100-zal. Ehhez több négyzet a hemacitométer szerezni egy átlagos életképességének mérésére .