Sejt- ELISA- alapú protokoll

ELISA , vagy enzimmel kapcsolt immunszorbens vizsgálattal , használják , mint egy diagnosztikai eszköz az orvostudományban és a biológiai kutatás, hogy számszerűsíteni az összeget egy adott fehérje. Használ ELISA- antitestek detektálására a számunkra érdekes fehérjét , és olyan reagens, amely termel egy színt. Az összeg a szín kapcsolódik a fehérje mennyiségét . Sejttenyészet

sejteket kell helyezni a lyukakba, egy 96 - lyukú lemezen 100 mikro - liter táptalajok , és a sejteket egy éjszakán át hagytuk leülepedni . Ha tanulmányozza a sejtek reakciója olyan tényező , cellák kell a szérum - éhezve 24 órán át, majd stimuláljuk tényező vizsgált .
Rögzítése és a primer antitest

eltávolítása után a média, a kezelt sejteket fixáló például 3 százalék formaldehid, vagy metanol . A sejtmembrán permeabilizált kell , hogy lehetővé tegye az antitest behatolni a sejtbe. Permeabilizálás lehet elérni használatával Triton 0,1 százalék , ha metanolt korábban nem használták . A nemspecifikus kötődés lehet előzni a használata 10 százalék magzati borjú szérumot hígítottunk foszfáttal pufferolt sóoldatban. Eltávolítása után a blokk, a primer ellenanyag lehet alkalmazni, és egy órán keresztül inkubáltuk .
Másodlagos Antitest és Stain Matton

Távolítsuk el a primer antitest , és a mosófolyadékot háromszor. Másodlagos antitest hozzáadása kapcsolódik egy kimutatási szerrel , mint például a torma- peroxidáz. Inkubálja egy óra . Washington Add kemilumineszcens szubsztrát oldattal . Kialakítása és ellenőrzi a lemezt a színek intenzitását.