N Terminal Sequencing jegyzőkönyv

Edman- degradáció - egy jól ismert eljárás azonosítására az N -terminális aminosav a fehérje - követeli hasítása az aminosav , majd kromatográfiával vagy azonosító használatával elektroforézissel . Automatizált folyamatok felgyorsítására az N -terminális szekvenálás . A tények

fehérjék előállítják egyes cellák jár a hormonok , enzimek és más fontos szabályozói . A genetikai mutáció eredményeként abnormális fehérje , ami súlyos egészségügyi következményekkel járhat.
Folyamat

Az N -terminális aminosav hasítjuk végzett kezeléssel egy több reagensek , majd hidrolizáljuk alkotnak egy különálló aminosav. A vékonyréteg -kromatográfia, HPLC vagy elektroforézissel határozza meg a méret a aminosavat, és összehasonlítja azt az ismert méretű szabvány. Az új N-terminális végén a maradék fehérje hasítható lehet hasonlóképpen az azonosítás.
Automatizálás

Applied Biosystems vezetett a fejlesztés automatizálásával Edman- degradáció, amely megköti a tisztított protein egy membrán és kezeli azt fenilizotiocianát . A szabad aminosav hüvelyk automatikusan injektáltuk HPLC rendszerben az azonosítás.
Szövődményei

Fehérjék kell maradni viszonylag tiszta , és mentes a szennyező anyagokat , hogy pontosan meghatározzuk az N -terminális aminosav . Edman határok igényel nagy fehérjemolekulák töredezett kis peptid lánc már nem 50 aminosavat .