Hibaelhárítást gélelektroforézis

Poliakrilamid gélelektroforézis , vagy PAGE , a technika általánosan használt szerves molekulák elválasztására egy biológiai mintában. Molekulák kisebb méret és súly gyorsabban vándorolnak egy poliakrilamid gélen ha elektromos áram alkalmazzák . Tiszta elkülönülő sávokat általában befejezése után megfigyelt gélt inkubáljuk egy adott foltot. Ez egy viszonylag egyszerű módszerrel. Azonban hiánya , hogy a sávok vagy szalagok kenet vagy tisztátalan problémát jelezhet egy vagy több lépésben a módszer. Kövesse az alapvető irányelveket lehet elhárítani a gélelektroforézis módszert, ha az eredmények nem a várt módon . Ez az, amire szüksége van
Minőség bis : akrilamid vagy előre gyártott lapok
két üveglap
akrilamid : Bis
TBE puffer ( TRIS , bórsav, EDTA)
tápegység
Felső tárolókamrába
Alsó tárolókamrába
fehérje DNS minta
TEMED
ammónium persulfate
Gel folt

Show More utasítások
1

Kezdje az utolsó lépésben a gél elektroforézis és a munka első hátra. A gél- elektroforézis , az utolsó lépés, a festési eljárás használt minta sávok megfigyelni . Néhány problémát ténylegesen során előforduló festési eljárást . Azonban , porított foltokat jól kell oldani a megfelelő pufferben , mielőtt azokat használják egy foltot gélt. Győződjünk meg arról, a megfelelő koncentráció folt használták .
2

Ellenőrizze az áramellátást . Hiányában a sávok is jelzik áram vagy feszültség beállítása túl nagy volt , és a vizsgálati minták vándoroltak ki a gélt . Magas beállítások is okozhat minta komponensei vándorolnak át a gél túl gyorsan , ami a rossz felbontás és a sávok jelennek tisztátalan . Minták nem vándorolnak át a gél , ha az áramellátás beállítás alacsony. Minták is térjenek el az is, ahol voltak töltve , és nem vándorolnak át a gél .
3

Ellenőrizze a folyadékot akrilamid használt , hogy a leadott poliakrilamid gél . Jellemzően , a százalékos akrilamid használt leadott egy poliakrilamid gél tartományok 5-15 százalék. Minták álló nagyobb molekulák betöltődnek egy 5 százalékos , mert a nagy fragmentumokat gélen lassabb gélek lépni egy magasabb akrilamid százalékban. Kis molekulák betöltődnek egy százalékkal magasabb , mert az alacsony gél gél koncentráció nem lenne képes megoldására kisebb mintákat . Matton

4 Ellenőrizzük a reagensekkel végzett polimerizálásához használható fel akrilamid . A poliakrilamid gél képződik polimerizációjából folyadék keveréket álló biszakrilamid és akrilamid . Az ammónium -perszulfát és TEMED adunk az akrilamid gél képződésének katalizálására . Jellemzően , az akrilamid kell jeleit mutatják polimerizációs ( gél képződés) után 15 perccel az ammónium -perszulfát és TEMED adtak. Polimerizáció fordul elő, hogy túl gyorsan az eredménye a nagy mennyiségű ammónium- perszulfát. Túl kevés ammóniumperszulfát okozhat a hiányos vagy egyenetlen polimerizáció .
5

Ellenőrizze mennyiségét a minták betöltve. Magas koncentrációjú minták mozog lomhán a gél, és csökkenti a zenekar felbontást. A mintát , amely alacsony koncentráció nem lehet a gél után megfigyelt már foltos. Ezek a foltok vannak korlátai , mint a minimális mennyiségű mintát, amely lehet leképezett eredményeként folt érzékenység. Matton 6

Megerősítés minősége a minták betöltve. Sók és egyéb szennyező anyagok jelen a mintában befolyásolhatja a mozgás a minta mentén a gélből. Elektroforézis az eredménye az elektromos áram fut át ​​egy gél , amely tartalmaz egy áramvezető puffer; magas sókoncentráció a mintában befolyásolhatja a mozgását ennek áram segítségével a gélt. Az elszigeteltség a minta bele egy tisztító készlet, amely elkészíti a viszonylag tiszta mintát .
7

áttekintése szakirodalomból vagy írásos protokollt annak meghatározására, hogy a megfelelő oldalra használták , hogy elvégezhessék a kísérletet . A százalékos akrilamid PAGE jellemző a méret a vizsgálandó minta . A szakirodalom is konkrét információt vonatkozóan , hogy hozzanak létre az áramellátás és aránya minta migráció .