Terjedése rekombináns plazmidok

Talált néhány baktériumok és élesztők , plazmidok viszonylag kicsi , önreprodukáló gyűrűk DNS kívül esik a sejt kromoszóma fő . Ezek nagyon hasznosak a génsebészet , mivel ez viszonylag könnyen splice kiválasztott gének más fajokból származó plazmidokba , át őket befogadó sejtek között azonos vagy különböző fajok , és serkentik őket, hogy szaporodik - vagy szaporítani - sokkal magasabb , mint a normális - vagy erősített - áron. A rekombináns plazmidok egyszerűen azok , amelyeket génsebészeti géneket tartalmaznak a más fajok . Különösen amplifikált szaporítás rekombináns plazmidok gyorsabban és könnyen kifejezni kívánt fehérjék egy nagy, ipari méretekben. Ez az, amire szüksége van
érdekében A meglévő plazmid és a gén könyvtárak, vagy plazmidok és a gének már izolált magát a fogadó szervezetek és az összeillesztették
Cell kultúrával felszerelés
Erősítés anyag (ok) , mint például a kalcium-klorid , áramütést , hideg és meleg, chloramphenicol, áramütés , és /vagy a Taq polimeráz enzimet

Show More utasítások
1

választása az erősítési eljárás vagy eljárások, amelyek a legjobban illeszkednek az adott rekombináns plazmidot és a fogadó szervezet. Egyes eljárások jobban működnek bizonyos plazmidok és házigazdák , mint másokkal. Ha dolgozik egy új , még mindig kísérleti rekombináns plazmid és /vagy próbál meg egy másik befogadó faj , akkor lehet, hogy meghatározzák a legjobb erősítés folyamat vagy folyamatok próbálgatással.
2

Próbálja ki a nevezett folyamat átalakítása , ha az adott plazmid és a gazdasejt fajokat lehet reagálni. Chill a sejteket, és a plazmidok nulla fok C kalcium-klorid ( CaCl ) oldattal. Gyorsan emeljük a hőmérsékletet 37-43 ° C. Ez a hirtelen hőmérséklet-változás hatására a sejtmembránok , hogy akár nagyobb mennyiségű plazmid .
3

küldése nagyfeszültségű villamosenergia- impulzusok át az oldaton plazmidok és sejtek elektroporáció , ha a kívánt amplifikációs módszer. Ez a technika növeli a sejtmembrán permeabilitását a plazmidokat . Matton 4

megvilágít a gazdasejt kultúra alacsony a klóramfenikol antibiotikum generálni annyi, mint száz plazmidok sejtenként. Ez a módszer replikációját elnyomja a fogadó sejtek fő kromoszómák míg indukáló szabályozatlan plazmid replikációját , beleértve a gén lapolva bele.
5

Alkalmazzuk a polimeráz láncreakció vagy PCR módszerrel plazmid kópia generálni nagyon magas nagyságrenddel . PCR alapú DNS polimerizáció a kémiai reakció révén , amely a genetikai szekvenciák alkotják a természetben. PCR leggyakrabban katalizálja a hőstabil enzim nevezett Taq polimeráz , vonjuk ki a baktérium faj él a meleg források.