Co - immunprecipitációs protokoll

Co - immunoprecipitációval protokoll ( Co - IP) egy széles körben használt eljárás elemzéséhez fehérje kölcsönhatás . Az eljárást általában három lépésből áll . Egy antitest kerül bevezetésre , hogy egy sejt -lizátum , az ellenanyag - fehérje komplexet kémiailag kötött és a fehérjét azonosítottak elemzése révén . Co - Immunprecipitációs Összegzés

Co -IP áll egy sor olyan intézkedést , hogy biztosítja a pontos vizsgálati eredmények . Az első lépés egy antitest igényel specifikus fehérjét hozzá kell adni. A második lépésben , a protein -G vagy protein -A- Sepharose használunk kötődni az antitest - fehérje komplexet . Végül szekvenálás tisztított fehérje csíkot , vagy Western blot analízis , azonosítja az együtt leváló fehérje .
General Steps

A protokoll osztható három általános lépések ideje a mechanika a folyamat . Az első lépés az , hogy a munkafolyamat az eljárás lefolytatásához a legkevesebb idő . A második lépés az általános szempontok az eljárás . Az utolsó lépés a hibaelhárítás .
Konkrét lépéseket

munkafolyamat kezdődik kultúra előállításánál a blot analízis és zárul jelenlétének meghatározása minden fehérjék. Általános megfontolások állnak, kulcsfontosságú lépést , mint a pre- tisztítás , a választás a pufferek és kiválasztása Protein A vagy Protein G gyanta . Hibaelhárítás foglalkozik olyan kérdésekkel, mint nem kimutatása fehérje kötődése az antitestek fehérjék , antitest fragmentumok és annak lehetőségét, hogy sikertelen Co - IP .