Miért kellett minden lépés után kimosni a kutakat?

A mikrolemez lyukak mosása a különböző biokémiai és molekuláris biológiai vizsgálatok minden lépése után, mint például az ELISA (enzim-kapcsolt immunszorbens vizsgálat), a DNS/RNS izolálás, a PCR és a Western-blot a kísérleti protokoll lényeges része. A mosási lépések célja a visszamaradt reagensek, reakciókomponensek vagy bármely szennyeződés eltávolítása, amelyek megzavarhatják a következő lépéseket, vagy befolyásolhatják a vizsgálat pontosságát és specifitását.

Íme néhány ok, amiért a mosási lépésekre van szükség:

A nem kötött anyagok eltávolítása: A reagensek vagy antitestek hozzáadása utáni mosási lépések segítenek eltávolítani a meg nem kötött anyagokat, például a felesleges antitesteket, a nem specifikus kötőmolekulákat vagy a reakciókomponenseket, amelyek nem kötődnek be vagy nem kötődnek a szilárd fázishoz. Ez biztosítja, hogy az érzékelési jel specifikus és mentes legyen a háttérinterferenciától.

A keresztszennyeződés minimalizálása: A mosási lépések hatékonyan csökkentik a minták közötti keresztszennyeződés kockázatát. Ez különösen fontos, ha több mintát dolgoznak fel egyidejűleg, mivel ez megakadályozza a reakciókomponensek vagy szennyeződések egyik kútból a másikba való átjutását. A mosás segít megőrizni az egyes mintaeredmények sértetlenségét és pontosságát.

A zavaró anyagok hatékony eltávolítása: Mosás szükséges az olyan anyagok eltávolításához, amelyek zavarhatják a további lépéseket. Például egy ELISA vizsgálatban a mosás segít eltávolítani a nem kötött konjugált-antitest komplexeket, ezáltal csökkenti a háttérszín kialakulását és fokozza a kolorimetriás reakció specifitását. A PCR során a mosás eltávolítja a nukleotidokat, primereket és polimerázokat az előző amplifikációs ciklusokból, így minimálisra csökkenti az átvitt szennyeződés kockázatát és biztosítja a pontos amplifikációt a következő ciklusban.

Szabványosítás és reprodukálhatóság: A szabványos mosási eljárások követésével a kutatók biztosítják, hogy a körülmények konzisztensek legyenek a kísérletekben és a különböző laboratóriumokban. Ez a következetesség kritikus fontosságú a megbízható és reprodukálható eredmények eléréséhez.

A mosási eljárás magában foglalhatja egy többcsatornás pipetta vagy egy automata lemezmosó használatát a mosópuffer adagolásához és leszívásához. A mosópuffer tipikusan pufferolt sóoldat, amely hasonlít a vizsgálatban használt eredeti puffer összetételére, de nem tartalmaz reakciókomponenseket.

A túlmosás nélküli megfelelő mosás kulcsfontosságú. A túlzott mosás a szilárd fázishoz kötődő lényeges komponensek elvesztését eredményezheti, és befolyásolhatja a vizsgálat érzékenységét. Ezért a mosási protokollokat gondosan úgy tervezték meg, hogy a nemkívánatos anyagok optimális eltávolítását érjék el, miközben megőrzik az immobilizált molekulák vagy a kérdéses analitok integritását.