Egészség és a Betegség
A " lízis " származik a görög gyökér jelentése " lazítani ". Sejtlízist , az erők kezében a sejtmembrán együttesen megszakad , emiatt a törés . A cella tartalmát ezután megjelent a környező oldat , beleértve a fehérje az érdeklődés. Általában ez úgy történik, a mellett a kémiai megoldás úgynevezett lízis pufferrel.
Előkészítése Lysis Buffer
A választás a lízis pufferrel függ a sejttípustól , a fehérje és az alkalmazás .
lízis számtalan különböző megoldások állnak rendelkezésre a kereskedelemben , vagy a közös recepteket lehet használni, hogy készítsen a közönséges lízispufferben vegyszerek. A legjobb puffert használni függően változik a felhasznált sejttípus , a fehérje kell különíteni, és a végső alkalmazás, de általában lízisoldattal molekulát tartalmaz egy detergenst (gyakran NP -40 vagy a Triton -X ), amely feloldódik a cella membrán , valamint a pufferek , kelátképzők és proteáz inhibitorok , hogy megakadályozza a fehérje károsodását , ha megjelent a védett környezetet a sejt .
lízis feltételei
végrehajtása lízis alatt jéghideg körülmények megóvja a fehérje az érdeklődés.
lízis puffert általában használt jéghideg , és a folyamat lizáló hagyjuk végbemenni hideg körülmények között . Az oldatot enyhén rázattuk , hogy ösztönözze még diszperziója a sejteket, és lízis termékek. Miután körülbelül 5 és 10 perc, a lízis oldatot semlegesítjük általában hogy megakadályozzák a további tevékenységet. Ezek az óvintézkedések károsodását csökkentik a fehérje mennyiségét , és csökkenti a termelt idegen törmelék , amely később el kell távolítani .
Egyéb módszerek Lysis Matton Mechanikai erő is fel lehet használni, hogy lizáljuk a sejteket. Bár a kémiai lízis
a legkíméletesebb és leggyakrabban használt , keményebb mechanikus módszereket sejteket lizálni lehet használni bizonyos esetekben. Ezek közé tartozik a szonikáció , ismételt fagyás - olvadás ciklusok és homogenizálás , ami egy folyamat cefrézés . Nézze meg a szakirodalom , hogy megtalálják a legmegfelelőbb módszer a konkrét esetben .