A T- Cell Culture Protokollok

T-sejtek , amelyek egy család tartoznak nevezett immunsejtek limfociták , amelyek során keletkező adaptív immunválaszt. A T- sejtek származnak csontvelő őssejtek és érett a thymusban . Számos különböző típusú T-sejtek , mindegyik más-más funkciót. A T- sejtek megkülönböztethetők egymástól a mellékelt T-sejt antigén receptor . A betegek egy részénél a T-sejtek CD4 markert hordozza , és segít , hogy immunválaszt indukálni . Forrásai a T- sejtek Matton

T-sejtek a következő címen szerezhető különböző forrásokból , beleértve a lépet , a nyirokcsomók, a csecsemőmirigy és a , de a perifériás vérben a legkönnyebben hozzáférhető forrás a T- sejtek tenyészet célokra . A vérmintákat alaposan ellenőrzik a fertőzések és egyéb szennyeződéseket , és óvatosan kezelni alatt a biztonsági kabinet . A T- sejteket több okból is , beleértve a toxicitás mérések és tanulmányozni vakcina immunológiai válaszokat.
Izolálása

T-sejtek általában elválasztjuk a teljes vérmintákból sűrűség gradiens - elválasztás, például a T- sejtek kevésbé sűrű, mint a vörös vérsejtek, mint amilyenek a vörösvértestek , és ezért centrifugálással extraháljuk . Egy megfelelő semleges só oldatot adunk a vérmintát , majd Ficoll Isopaque megoldást. Ficoll- Isopaque sűrűsége nagyobb, mint a T- sejtek , de kevesebb , mint a centrifugálás során az eritrociták és a középső réteg képezi a két -sejtek, T-sejtek , amely lehetővé teszi , hogy el kell távolítani a tetején. A T- sejtek tovább centrifugáljuk , a felülúszót eltávolítjuk , és egy kis alikvot számít , hogy meghatározzák a sejt életképességét. A cellákat vagy közvetlenül a kísérletekre vagy a mélyhűtött későbbi használatra .
Krioprezerváció

Krioprezerváció reagensek előre elkészített , hogy elkerüljék a T-sejt bomlás szobahőmérsékleten hőmérsékletet. Ha ez nem lehetséges, a sejteket jégen tartjuk vagy hűtőszekrényben . Reagensek állnak sejttenyésztő média és 10-13 százalék a humán szérum albumint ( HSA) fehérje , valamint a sejt- táptalaj és 10 százalék dimetil-szulfoxid ( DMSO). DMSO minimalizálja a kiszáradás , a pH változások , és elektrolit koncentráció változások kapcsolódó fagyasztás . A T- sejteket újra szuszpendáljuk a reagens -tartalmú sejt- táptalaj , valamint a HSA egy cryotube . A reagens - DMSO- tartalmú lassan hozzáadjuk a sejtekhez, és óvatosan forgatni . A sejteket ezután egy fagyasztás izopropanolt tartalmazó edénybe , hogy biztosítsa a fokozatos hőmérséklet-csökkenés és tárolják.
Thawing

Amikor a T - sejteket felolvasztottuk , egy cryotube eltávolítjuk tárolási és inkubáljuk 37 Celsius fok. Ezt követően , a megfelelő közeget felolvasztás lassan hozzáadjuk a sejtekhez , míg a kétszer hangerő elérésekor át egy külön csőbe , és centrifugáljuk. Benzonase néha adunk a felolvasztás médium , hogy megakadályozza a csomósodást az elpusztult a T- sejteket. Az üledéket centrifugáljuk reagált sejttenyészetben média és a sejt életképességét értékelik. A T - sejtek , akkor kész a megfelelő kísérleteket .