Egészség és a Betegség
Egyes sejtek tartsák be a fenekét a Petri-csésze vagy marad felfüggesztették a folyadék . A sejtek lehetnek növényi vagy állati eredetűek. Felhasznált sejtek lehetnek szövettenyészetekben primer sejtek , ami azt jelenti, szüretelték közvetlenül egy organizmus , vagy egy sejtvonal , amely már fenn a tenyészetben. Sejtvonalak gyakran a rákos sejteket , és ezt figyelembe kell venni , ha tervez vagy tolmácsolási kísérletet .
Kényeztesse Cells Óvatosan
Adherens sejteket eltávolítják a Petri-csészében az áthaladás a kaparó , vagy egy proteáz , tripszin és EDTA általában . Megkarcolása megöl sok sejteket kell használni, és csak akkor, ha elkészítése sejtlizátumokat (folyékony készítmények cellatartalom elemzéshez ), vagy ha tripszin /EDTA-t feltétlenül el kell kerülni .
Trypsinizing eltávolítja nemcsak a fehérjék, amelyek sejtek tartsák az edényt de a legtöbb más fehérjék a membrán a cella is. Cells labdát, és eltart egy ideig , általában egyik napról a másikra , hogy helyreállítsa a kötés az étel . Hozzáadása minimális mennyiségű tripszin - mintegy 1 ml -es lombikba egy 25cm2 - ringató a lombikot öt másodperc vagy kevesebb , hogy a szőrzet egyrétegű , majd szakadó le a felesleges vagy szívó tripszin csökkenti a tripszin mennyiségét , amelyre a monoréteg van téve. Hagyja, hogy a sejtek pihenni az inkubátorban alatt tripszinizáció .
Miután a sejtek csúszik le az alsó az edénybe, adjuk hozzá a média a szérum és szívja a lizátum fel és le a pipetta óvatosan . Hagyjuk egy kicsit a média továbbra is az étel , ahogy pipettázzon fel-le többször a szétesés csomókat , és kap egy még felfüggesztést .
Ne szívja buborékok a pipetta . Továbbá, nem erőteljesen keverje vagy rázza össze a sejtszuszpenziót ; A sejtek nagyon törékeny ez balled -up állapotban .
melegítésére inaktiválása vagy nem a hő inaktiválja
sejttenyésztési technikákat gyerekcipőben járnak , magzati borjú szérummal ( FBS) volt ismert, hogy tartalmaznak komplement fehérjék, amelyek az immunrendszer fehérjék, amelyek sejtek lizálják . Komplement fehérjék nem kívánatos sejttenyészetben . Hő - inaktiváló FBS 56 ° C -on 30 percig lehetővé teszi majd, komplement fehérjék inaktív. Előmelegítés FBS 37 ° C is elegendő ahhoz, hogy inaktiválja komplement fehérjék .
A korai időkben , hő inaktiválja FBS is megölte mycoplasma és egyéb szennyeződéseket. Abban az időben , a szűrő sterilizálást végeztünk 0.45um szűrőket. Ma szűrő sterilizálja FBS és a média segítségével 0.1um vagy akár 0.04um szűrőket. Nem mycoplasma csúszik keresztül .
Így marad nekünk a kérdés, hogy a hő inaktiválja .
Heat inaktiválása degradálja az összes komponenst az FBS - mint a vitaminok, aminosavak és növekedési faktorok - esetleg a küszöb alatt néhány válogatós sejtvonalak .
Ha dolgozik egy lassan növő vagy válogatós sejtvonal , fontolja csupán szűrő sterilizáló a FBS . Lehet, hogy megtalálja ez növeli a megbízhatóságát a sejteket.