Mérési módszerek a NADPH - oxidáz

A NADPH-oxidáz enzimet azonosították , mint a termelő reaktív oxigén gyökök folyamatok során , beleértve a növekedést a vaszkuláris sima izom sejteket. Ezek a reaktív fajok kapcsolódnak egy sor betegségek, beleértve a magas vérnyomás , a cukorbetegség , a rák és a gyulladás ; nyomon követésére szolgáló módszerek az ezen enzim aktivitása kritikus a kezelés lehetséges fejlődését. NADPH oxidáz

oxidáz családjába tartozik enzimek , amelyek segítik az elektron közötti átcsoportosítás NADPH és az oxigén . Azonban , a NADPH -oxidáz rendelkezik azzal az egyedülálló képessége, termelő reaktív oxigén fajok ebben a reakcióban , míg a család többi tagja , ahol a reaktív oxigén gyökök generálódik keresztül más módon. Egy multimer fehérje komplex , a NADPH -oxidáz áll, a membrán -kötött flavocytochrome b558 , amelyet használnak, mint a mérés markert.
Reaktív oxigéngyökök ( ROS) Generációs

a fő forrása a ROS , különösen a hidrogén- peroxid, a NADPH -oxidáz termel kis mennyiségben , de következetesen keresztül izoforma kifejezve a vérerekben, amelyek részt vesznek a jelátviteli folyamatokban. Ez a következetes termelés végül elborít a természetes antioxidáns -rendszer , ami a veszteséget védő vegyületek, mint például a nitrogén-oxid , valamint a generációs még erősebb ROS .
Kemilumineszcenciás módszer

Kemilumineszcencia lehetővé teszi a rendkívül érzékeny , automatizált mérésére NADPH- oxidáz aktivitás több mint egy koncentrációtartományban. Során ezt a módszert , a NADPH szubsztrátot adunk a szöveti mintát tartalmazó NADPH- oxidáz . A reakció , a ROS keletkezik és reakcióba lép a vegyület lucigenin chemilluminescent hogy készítsen egy hatás , amely mérhető. Lumineszcencia egyenesen arányos a NADPH- oxidáz aktivitás, mint az enzim határozza meg a reakció sebességét .
Kinetikai Analitika keresztül Áramlási citometria Matton

Ebben a módszerben , a szöveti mintákat elemezzük keresztül áramlási citometriás . Csontvelő elválasztjuk a mintát Hanks ' Balanced Salt Solution . Specifikus antitestek detektálására foltokat és hozzáadjuk a mintát polisztirol csövekben. A mintát ezután inkubáltuk , mostuk Hanks ' Balanced Salt Solution, jelzett molekuláris szondák és áramlási citometriával elő . Vezérlő csöveket is tett összehasonlítás és kalibrálni az áramlási citométer . A gép ezután futott és mérések rögzíteni .