Hogyan készítsünk restrikciós térképét

A korai napokban a molekuláris biológia , a tudósok általánosan használt korlátozása feltérképezése, hogy megértsük a gének voltak tanul. A modern kutató laboratóriumok , korlátozás leképezés nagyrészt elavult , mert szekvenálás vált szélesebb körben elérhető, és gazdaságosabb, mint a múltban. Vannak azonban olyan esetek, amelyekben egy restrikciós térképét megfelelő lehet egy kutató neki vizsgálatok elvégzésére . Az általános megközelítés a restrikciós térképezés használatával jár emésztő enzimek lebontják fizikailag egy mintát a DNS-t. Ha az intézkedés a termékek az emésztés , akkor " újra össze " a darabokat, és levezetni az eredeti DNS-szekvencia . Ez az, amire szüksége van
Restriction enzimek
minta DNS
Tompítóoldat
jég és a forró vízfürdőbe
Gél elektroforézis berendezések
Show More utasítások
DNS emésztés

1

Add a restrikciós enzim a DNS-mintáját . EcoR1 használjon , egy általánosan használt enzimet , például.
2

hozzáadása a keveréket egy puffer oldat , amely lényegében egy hely a reakció fordul elő.
3

Emeljük a hőmérséklet a reakció , amint azt a New England BioLabs utasítás. Mindegyik rendelkezik egy restrikciós enzim specifikus reakció hőmérséklet, amelyen a legjobban működik . Továbbá, minden enzim specifikus nukleotid -szekvenciát úgy tervezték , hogy cél . EcoRI átvizsgálja és vágja le a DNS- nukleotid sorrend CAATTC . Ez a pontos sorrendje a nukleotidok léteznie kell az enzim kötni és vágja a DNS-t . Amíg ezen a ponton, az összes anyagot kell tartani jégen , hogy megakadályozzák a nem kívánt aktivitást. Matton 4

Miután hagyjuk, hogy a reakció fordul elő , mint a kézi jelzett , fuss a keveréket egy gél elektroforézis készüléket külön a DNS töredékek alapján méretét. A legkisebb töredékek fog mozogni legtávolabbi szerte a gélből.
5

Mérjük meg a megtett távolságot az egyes DNS- fragmentumot. Ez az öt lépés kell ismételni több különböző enzimekkel külön-külön .
Építése korlátozásáról térkép
6

A kapott adatok gél , összegyűjti az összes információt , amit találtak segítségével a különböző restrikciós enzimekkel . Matton 7

levezethetjük a sorrendben a restrikciós helyek összehasonlításával , a különböző hosszúságú fragmens által termelt minden egyes enzimmel. Például, ha a # 1 enzimet termelt két egyenlő hosszúságú fragmentumokat és enzim # 2 fragmentumok előállított három egyenlő hosszúságú , akkor megállapíthatjuk, hogy az enzim # 1 vágások felénél a DNS-t és a # 2 enzim kivágja a DNS-t a kétharmadát.

8

levont 2. lépésben össze sorrendjének restrikciós helyeket a DNS-t .